随着TaqDNA聚合酶与PCR技术的完美结合,PCR已成为一种重要的实用工具,它在科研、病原微生物检测、遗传基因检测、肿瘤伴随诊断等医学领域,以及法医学、环境监测与食品安全等领域得到了广泛应用。随着技术进步,PCR技术正向更加便捷、灵敏和经济的方向发展。为了满足客户对高效、便捷的需求,全预混试剂逐渐成为主流,取代了传统的分步法试剂。
在新冠疫情、非洲猪瘟等大规模疫情的应对过程中,检测机构越来越重视全预混试剂的稳定性,以确保检测结果的准确性。抗体热启动修饰的TaqDNA聚合酶作为一种成熟的商业化产品,因其在一定程度上解决了PCR扩增的非特异性问题,广泛应用于各个领域。然而,常规探针法检测试剂中的Taq酶5’→3’核酸外切酶活性可能导致引物和探针等重要材料的降解,从而影响扩增效率和试剂稳定性。市场竞争与企业开拓国际市场的压力促使试剂制造商不断提升产品稳定性。现今的要求是,全预混试剂必须能在4℃下加压14天或37℃下加压7天后仍能保持优良的检测性能。
为此,国内外企业始终在探索和开发更高效的Taq酶抗体,以期全面封闭Taq酶的5’→3’聚合活性与5’→3’核酸外切酶活性。新冠疫情以来,各厂家推出了双功能封闭抗体产品,但大多表现不佳,要么难以同时实现90%以上的封闭效率,要么在温度超过55℃时抗体与Taq酶解离,导致封闭效果减弱。为了解决这一问题,尊龙凯时通过B细胞克隆技术,对筛选出的B细胞进行单细胞光导系统筛选,以构建线性表达框,并进行抗体的表达与验证。在鉴定和筛选不同抗体及其组合的封闭效果过程中,研发团队还发现不同的Taq酶抗体之间存在协同作用.
传统上,人们认为可以通过选择分别针对Taq酶的5’→3’聚合活性与5’→3’核酸外切酶活性的特异性抗体,将两株抗体混合来实现对Taq酶双功能的完美封闭,但实际效果往往不尽如人意。通过在相对较好但未完全封闭的两株抗体组合中添加第三株抗体,尊龙凯时发现Taq酶的双功能封闭效果得到显著提升。最终,经过深入筛选与组合,尊龙凯时研发的全封闭Taq酶抗体产品由三株抗体按优化比例组合而成,表现出在70℃时同时封闭Taq酶99%以上的5’→3’聚合活性及5’→3’核酸外切酶活性。
尊龙凯时的全封闭产品提升了封闭效率与稳定性,能够有效防止因引物与模板错配或其他重要成分降解而导致的非特异性扩增。在保证高扩增灵敏度的同时,该产品在95℃下仅需30秒的热激即可释放95%以上的酶活,确保了试剂的高效性。此外,该产品在封闭效率与稳定性方面显著优于市场上现有的竞争产品。
我们严格控制全封闭TaqDNA聚合酶抗体的质量,重点检测相关核酸酶残留和宿主核酸残留,以防止污染下游应用试剂。尊龙凯时的全封闭抗体在不同应用中帮助客户优化了多重扩增等多种方案,具体包括与类似产品相比优越的全预混试剂稳定性,以及在法医检测中显著低的非特异性扩增。同时,尊龙凯时提供的全封闭抗体可以在低于70℃时有效地封闭Taq酶的5’→3’聚合活性与5’→3’核酸外切活性,为广泛的生物医疗应用提供了解决方案。