尊龙凯时的细胞培养技术对生物医学研究具有重要意义，特别是在细胞系和细胞株的建立过程中。本文将对此进行详细探讨。

一、概念

1. 细胞系（Cell Line）：细胞系是指由原代培养首次传代成功后形成的细胞群体，组成该细胞系的细胞源于原代培养物中的细胞世系。

2. 细胞株（Cell Strain）：细胞株是通过选择法或克隆法从原代培养物或细胞系中筛选出具有特殊性质或标志物的细胞。细胞株的特殊性质或标志需要在整个培养过程中保持不变。如果细胞不能继续传代或传代次数有限，则称之为有限细胞株；若能够持续传代，则称为连续细胞株。对于人类肿瘤细胞，若在体外培养超过六个月且稳定生长，则可称之为连续性株或系。

二、建立细胞系（或株）的要求

细胞的有效鉴定取决于具体情况，并没有统一的规定。对于原代培养细胞，只需确保供体均一，取材部位与组织类型稳定。特别是在长期培养以及反复传代时，需注意以下几点：

1. 组织来源：需明确细胞供体的物种来源（例如，人类或动物）、性别、年龄以及取材的器官或组织。如为肿瘤组织，需提供临床和病理诊断信息及病历号。
2. 细胞生物学检测：需了解细胞的基本生物学特性，包括形态、结构、生长曲线和分裂指数等。如为肿瘤细胞，需要通过软琼脂培养和异体接种实验确认其恶性特性。
3. 培养条件和方法：应阐述细胞系（或株）适应的培养环境，包括所用培养基、血清种类与用量，以及适宜的pH值。

三、细胞建株的要点及基本过程

(一) 肿瘤细胞培养技术要点

1. 取材：材料主要来自外科手术或活检的肿瘤组织，需选择瘤细胞活力较好的部位进行取材，避免使用坏死组织。若无法立即培养，可进行冻存。

2. 成纤维细胞排除：肿瘤组织中常混杂成纤维细胞，需通过机械刮除、贴壁法、消化法等手段仔细排除，以免影响肿瘤细胞的生长。

3. 提高培养存活率和生长率：因肿瘤细胞在体外培养困难，建立可传代的细胞系更具挑战。可采用适宜底物及细胞生长因子，例如胰岛素和激素等，以增强细胞的适应性和生长率。

(二) 人类淋巴母细胞建株方法

1. 在离心管中加入4ml肝素抗凝血，随后加入2ml RPMI 1640培养基，混匀后静置30分钟，缓慢加至淋巴细胞分离液液面。

2. 于1500rpm下离心15分钟，并吸取白细胞层至另一个离心管中，再用RPMI 1640洗涤白细胞两次。

3. 将白细胞接种至1ml RPMI 1640培养基，加入10μl环胞霉素和100μl EBV液，混合均匀。

4. 将细胞在37℃水浴摇床中培养3小时，速率为40次/分钟，随后再度于1500rpm离心15分钟。

5. 将细胞接种至含有谷氨酰胺1mM/ml的培养基中，加入10μl环胞霉素，保持在37℃培养。

6. 观察细胞转化及生长情况，决定是否进行半量换液，通常需进行1-2次，并保持环胞霉素浓度。

7. 待细胞数量明显上升并形成团块后，可转入25ml培养瓶，添加1-2ml培养基，并在37℃培养10至15天。

8. 当细胞生长达到一定数量后，需要进行冻存，且在冻存前需进行核型分析和存档。

通过对细胞系和细胞株的标准化操作，尊龙凯时致力于推动生物医药领域的研究与发展。本文为细胞培养的基本理论与实践，希望对相关领域的研究人员提供参考。